病理组织切片的基本程序有哪些：实操分步说明

病理组织切片的基本程序有哪些，完整流程依次为取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、展片捞片、染色、封片，这套流程适用于外科手术标本、内镜活检标本，不适合骨髓、脑脊液、细针穿刺这类微量细胞标本，微量标本优先采用细胞涂片而非石蜡切片流程，你在操作时可以按顺序核对每一步，漏做固定会直接造成组织自溶，最终切片无法判读。

病理组织切片取材与固定

取材就是把送检的组织标本修剪成合适大小，常规石蜡块厚度控制在0.2到0.4厘米，长宽不超过2厘米，你要避开坏死区域，优先选取病变和正常组织交界的部位，同时做好标记区分标本方位。固定是用固定液锁住组织内蛋白，阻止细胞自溶和腐败，临床最常用10%中性福尔马林固定液，组织放入固定液后，液量至少是组织体积的10倍，常温下固定时间一般6到24小时，组织块太厚会出现固定不足，内部细胞结构破坏。

固定不充分的组织，后续所有步骤都无法补救。

病理组织切片脱水、透明与浸蜡

脱水是逐步脱去组织内部水分，水不能和石蜡相融，所以要用梯度乙醇完成置换，乙醇浓度从低到高依次浸泡，避免组织快速收缩变形。透明剂可以溶解乙醇，同时能和石蜡互溶，常用二甲苯，组织经过透明后肉眼会呈现半透明状态，透明时间不能过长，二甲苯过度浸泡会让组织变脆，切片时容易碎裂。浸蜡是把透明后的组织放到融化的石蜡里，让石蜡充分渗透进组织间隙，浸蜡温度维持在略高于石蜡熔点，一般56到58摄氏度，温度过高会损伤细胞形态。

病理组织切片包埋、切片与捞片

包埋是将浸蜡完成的组织放入包埋模具，灌入液态石蜡，摆放好组织方向，冷却后形成坚硬蜡块，蜡块可以长期保存，方便后续反复切片复查。切片依靠轮转切片机操作，常规切片厚度3到4微米，厚度偏厚会造成细胞重叠，影响病理医生观察细胞核形态，切出来的蜡片会卷曲，需要放到温水展片台上舒展，水温控制在42到45摄氏度，温度太高会融化蜡片。舒展平整后，用干净防脱玻片把蜡片捞起，沥干水分再放入烤片架烘烤，让蜡片牢固贴在玻片上，染色时不容易脱落。

病理组织切片染色与封片

苏木素-伊红染色也就是HE染色，是病理常规染色，苏木素染细胞核，呈现蓝紫色，伊红染细胞质和细胞外基质，呈现红色，染色前要先脱蜡，把玻片上的石蜡溶掉，再经梯度乙醇水化才能进染液，染色之后还要脱水、透明，去掉玻片上多余水分。封片是在透明后的组织切片上滴加中性树胶，盖上盖玻片，隔绝空气和水汽，防止切片褪色，做好的切片可以长期保存用于阅片。

不同染色方案会改动染色阶段试剂顺序，其余基础程序不变。

这套石蜡切片流程，是国内病理科普遍采用的常规石蜡制片流程。

快速冰冻切片不属于这套石蜡切片流程，冰冻切片省略脱水浸蜡包埋，依靠低温冷冻组织后直接切片，多用于术中快速诊断，组织形态保存效果弱于石蜡切片。